在运用前与室温平衡，再进行测定。在ELISA试剂盒中通常有两次抗原抗体反响，即加标本和加酶联系物后。抗原抗体反响的完结需要有必定的温度和时刻，这一保温进程称为温育（incubation），有人称之为孵育，在ELISA试剂盒中似不恰当。
ELISA试剂盒属固相免疫测定，抗原、抗体的联系只在固相表面上发作。以抗体包被的夹心法为例，参加板孔中的标本，其间的抗原并不是都有均等的和固相抗联系的时机，只要最靠近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。
假如对试剂预备不太注意，在试验时将试剂从冰箱中拿出来即用，而疏忽了这种做法有可能影响后边温育时刻不行的疑问影响后边的操作。测定中试剂的预备最为要害的是，在试验开端前，将试剂盒先从冰箱中拿出来，在室温下放置20min以上后，以使试剂盒
2. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，防止起泡。
3. 洗刷进程十分重要，不充分的洗刷易形成假阳性。
4. 一次加样时刻最佳操控在5分钟内，如标本数量多，引荐运用排枪加样。
5. ELISA试剂盒请每次测定的一起做规范曲线，最佳做复孔。
6. 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定。
7. 在制造规范品、检查溶液工作液时，请以相应的稀释液制造，ELISA试剂盒不能混杂。
8. 底物请避光保留。
9、操控好每一步的操作时刻。
