ELISA试剂盒以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的运用，但操作中的各个环节对实验的检查作用影响较大，如不留意，有也许致使显色不全、花板等成果。我将操作中各个环节常出现问题的因素及解决办法总结于下，以期给同行带来一些启示，进步实验质量。下面分析ELISA实验操作中也许影响成果的因素，并给出相应的解决办法。
一、挑选试剂
挑选质量优良的检查试剂，严厉依照试剂阐明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
二、加样
ELISA试剂盒也许因素：
1）血清或血浆标本别离欠好即进行加样； 2）手艺操作中，加样板过多形成加样后放入孵箱前等待时刻过长(特别是室内温度较高时)； 3）加完标本再加酶试剂时酶溅起孔外。
解决办法：
1） 标本为血清：将血液先天然寄存1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟；标本为血浆：有必要运用含抗凝剂的血液标本搜集管，采血后有必要当即倒置采血管混合5-10次，放置一段时刻后，3000rpm离心15分钟；若在几天内检查，可放在2-8℃冰箱中，若要储存，则置于-20℃的低温冰箱内。 2) 加样后及时放入孵箱。 3) 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。 4) 假如选用AT或别的全自动加样，挑选FAME或别的后处理仪器加酶试剂。 5) 标本较多时，请分批操作。
三、 孵育
也许因素：
1) 孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗完全； 2) 孵育时刻人为延长，致使非特异性联系紧附于反响孔周围，难以清洗完全。
解决办法：
1) 贴封片或加盖； 2) 按阐明过程严厉控制操作时刻。
四、洗板
也许因素：
1) 选用手艺洗板，孔与孔之间液体穿插。 2) 选用半自动洗板机洗板时，洗液量不足，致使洗板不完全；洗板针阻塞，抽吸不完全；洗板不畅，致使洗板作用差。 3) 反响板过多形成洗板等待时刻长。
解决办法：
1) 确保洗液注满各孔，洗板针疏通，洗完板后在吸水纸（挑选洁净、无或少尘的吸水资料）上轻轻拍干； 2) 合理安排，或多用几台洗板机。
五、显色
ELISA试剂盒也许因素：
1) 显色剂制造后放置时刻过长或运用过期显色剂； 2) 加显色剂时溅起孔外形成液体回流。
解决办法： 1) 显色剂尽量在临用前制造，坚持不必过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不必； 2) 加样时坚持显色剂不外流； 3) A、B液应防止触摸金属器械。
六、停止
也许因素如加停止液时发生较多气泡，致使假阳性添加。所以在加停止液时应防止发生气泡。
七、读板
ELISA试剂盒如读板时板底不清洗等。应确保酶标板清洗。所以在全部操作过程中确保酶标板不触摸次氯酸； 尽也许完成ELISA检查规范自动化，有用进步检查质量。
在实际操作中，除了挑选优良试剂外，有必要严厉依照操作过程进行操作，一起作好室内质控、室间质评，以谨慎的工作作风检查每一份标本，才干确保检查质量。ELISA试剂盒如今国内已有适当数量的单位具有全自动酶标仪，这关于完成ELISA规范化检查、进步检查质量起到了重要作用。
