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包病毒好复杂,滴度低或不出毒啥情况?

发表时间:2021-06-07

病毒作为优秀的基因传输载体,一直是科学家们研究的热点。它是利用病毒具有传递基因组进入其他细胞的特性,进行感染。病毒可用于体内(in vivo)或细胞培养(in vitro)中的基因递送,在基础研究、基因疗法或疫苗中都有极高的应用价值。

病毒载体的包装是一个复杂的过程。

在做病毒包装实验中,常常会遇到:用同样一个病毒载体系统进行病毒包装实验,为什么有人做的很好,次次成功。有人却是时常做不出来,稳定性很差,不是滴度低就是根本不出毒?

 

影响病毒包装成功的因素
 

病毒载体的选择:腺病毒 or 慢病毒?

慢病毒:可插入细胞基因组,稳定表达,持续时间长。 包装周期短(一般两个月),感染效率相对于腺病毒要低很多。不能扩增,包装所得到的病毒滴度相对较低,不大适合直接用于动物实验。

腺病毒:感染效率高,很多细胞都能达到近 99%。纯化后的腺病毒可以直接进行动物活体注射。可以在体外扩增,一次包装所得到的滴度较高。不能整合到基因组,无法稳定表达。包装腺病毒的周期会比慢病毒长(一般两个半月)。

 

病毒包装的关键点

细胞因素、载体系统(尽量使用成熟的商业化载体系统)、构建重组的质粒正确与否、质粒抽提纯化情况、包装转染控制(24、48 小时的细胞及荧光状态判断)、目的基因对病毒包装影响 (基因大小、序列情况、蛋白功能毒性等)都会影响病毒的包装。

 

病毒感染效率

病毒本身的滴度,目的细胞种类以及个人操作都会影响感染效率。

 

病毒浓缩

建议病毒浓缩后再感染。

看完影响病毒包装成功的因素,你有没有感到包病毒好复杂?你有没有尝试了好久效果也不是很理想?如果你正在为此事发愁,告诉你一个好消息:现在有可直接使用的病毒颗粒,Addgene 为你免去包装的烦恼!


产品优势

1. 可以免去你包装病毒的烦恼,节省你宝贵的时间,提高研究的效率;

2. 优质的病毒颗粒可以提高对难转染细胞(如:原代细胞)的转染效率,帮助你更快地得到研究结果,促进科学研究;

3. Addgene 拥有全球强大的质粒库资源,可以提供最新文献中质粒的病毒包装服务,且每个病毒服务的分发请求同时包含原始质粒的 DNA,确保你在需要时可以直接使用,免去二次订购的烦恼。
 

△ 图源:Addgene 官网

Addgene 慢病毒包装流程

 

Addgene 可提供高质量和高滴度的病毒制剂

 

所有病毒制剂均按照优化后的标准方法进行生产,在分发给客户之前,病毒制剂都会进行滴度测定并完成 Addgene 的质量控制(包括:转移质粒的确认、病毒基因组全测序、内毒素检测、纯度测定、无菌性检测、滴度测定等,具体病毒以官网说明为准)。目前,中国用户可以通过北京中原公司订购现成的病毒制剂。

 

△ 图源:Addgene 官网

包装后 AVV 病毒纯度鉴定结果


Lentivirus 慢病毒

慢病毒以纯化后的病毒颗粒形式进行分发,适用于体外使用。最低滴度会列在每个慢病毒的材料页上,并附以每批病毒的实际滴度报告。

? Pooled CRISPR Lentiviral Libraries

? Cas9 Lentivirus

? gRNA Lentivirus

? Non-CRISPR Lentivirus

更多最新产品请致电:400-8100-881,邮箱:addgene@sinozhongyuan.com 进行咨询。

 

AAV 腺相关病毒

AAV 也以纯化的病毒颗粒形式进行分发,它适合于体内或体外使用。我们提供 100μL 滴度在 2-10E12 vg/mL 纯化后的 AAV。实际效价滴度见每批次的报告。

? Chemogenetics AAV

? Retrograde AAV

? Optogenetics AAV

? Serotype Testing Control AAV


 

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