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本试剂盒可从PCR反应体系中回收得到不含盐或低盐、不含蛋白质、RNA 等杂质的高纯度DNA 片段。200bp-10kbp的DNA片段回收率 80%以上,并可回收单链、双链 DNA片段以及环状质粒 DNA。回收得到的片段DNA均可直接进行酶切、酶连、测序反应。
本试剂盒采用一种独特的平衡液处理吸附膜,该试剂能够激活硅基质膜,改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和稳定性,专一吸附DNA 的作用,同时还可消除高温/潮湿或其他不良环境因素对吸附柱造成的影响。
试剂盒组成
一、使用前准备
Buffer PG:开盖后如果长时间未使用,请检查Buffer PG的pH,确保pH≤7.5。
WB: 使用前请将6 ml(5T装)/60 ml(50T装)/240 ml(200T装)无水乙醇加入Buffer WB(试剂瓶上有标签提示)。
平衡吸附柱(选做):加入500 μl Buffer BL到吸附柱G柱中,10,000×g离心1min以平衡吸附柱。
二、操作步骤
1. 按照PCR产物:Buffer PG=1:5的比例加入Buffer PG(例如:50 μl PCR反应体系加入250 μl Buffer PG),颠倒混匀。若片段长度小于500 bp,按照1:6的比例加入Buffer PG。
2. (选做)将装有混合液的EP管转至高速离心机,室温下10,000×g离心30 sec到1min,以甩下吸附在离心管壁的残留溶液,*限度提高回收率。
3. 将上一步得到的混合液添加至本试剂盒提供的吸附柱G柱中(如一次无法加完,可分多次加入),室温下10,000×g离心1 min。弃掉收集管中的废液。如有需要,此步骤可以重复一次,对低浓度的核酸回收率有较明显提高。
4. 向吸附柱G柱中加入700 μl Buffer WB ,室温下13,000×g离心1 min ,弃废液。
5. 重复步骤4。
6. 室温下13,000×g离心2 min以彻底甩下Buffer WB的残留。
7. 取出吸附柱G柱并放入新的EP管中,将吸附柱G柱开盖室温下静置2 min,如有需要可放在空调风口吹1-2 min,以彻底去除残留的乙醇。
8. 向吸附柱G柱正中间加入15-50 μl (建议用量为30μl)Elution Buffer或ddH2O(50℃水浴后的溶解液溶解效果更好),静置5 min待吸附的质粒完全溶解,室温下13,000×g离心2 min即得到回收的DNA片段。
注:回收得到的 DNA可直接用于基因克隆、扩增、测序、酶切等。
三、DNA浓度及纯度
DNA浓度(μg/ml) = OD260 × 50× 稀释倍数,OD260/ OD280约为1.8-2.0。
PD6222-200T PCR产物回收试剂盒|现货北京
四、注意事项
本试剂盒只适用于琼脂糖凝胶电泳产物回收,不适用于聚丙烯酰胺凝胶回收。试剂盒中各成分均有一定的挥发性,请使用完后立即盖紧瓶盖,以防试剂污染或者挥发而造成效果降低。