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| 产地 | 进口 |
| 品牌 | |
| 货号 | PD6202 |
| 保存条件 | |
| 英文名称 | |
| CAS编号 | |
| 保质期 |
建议的PCR反应体系： （以50μl反应体系为例）
| 模板DNA（2.5 ng-100 ng） | 1 μl |
| Forward Primer(10 μM) | 2 μl |
| Reverse Primer(10 μM) | 2 μl |
| Pfu DNA polymerase | 2 μl |
| 10×PCR Buffer | 5 μl |
| dNTP （10 mM） | 1 μl |
| ddH2O | 补足到50 μl |
50μl PCR反应体系中模板DNA推荐使用量
| 大肠杆菌基因组DNA | 10 ng～100 ng |
| λDNA | 0.5 ng～5 ng |
| 质粒DNA | 0.1 ng～10 ng |
建议的PCR反应条件
| 步骤 | 温度 | 时间 | |
| 预变性 | 95℃ | 3 min | |
| 变性 | 95℃ | 30 sec | 25-35 cycles |
| 退火 | 50-70℃ | 30 sec | |
| 延伸 | 72℃ | 1-5min（1min/kb） | |
| 终延伸 | 72℃ | 5min | |
| 保温 | 4/16℃ | --- |
注意事项：
1、 本产品提供的酶量可进行多次反应，配置过程应将酶尽量放在-20℃冰盒中。
2、PCR的反应液请在冰上配制，然后置于PCR扩增仪上进行PCR反应。这种冷启动法（Cool Start Method）可增强PCR扩增的特异性，减少PCR过程中的非特异性反应，能得到良好的PCR结果。
3、 PCR反应后，加入本产品提供的6×Loading Buffer按5:1混合均匀后加入凝胶孔进行电泳。
PD6202-100T Pfu DNA Polymerase|现货北京
可能出现的问题及解决方案：
1．假阴性，不出现扩增条带
PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备②引物的质量与特异性③酶的质量 ④PCR循环条件。寻找原因应逐个排除。
2．假阳性
出现的PCR扩增条带与目的靶序列条带一致，有时其条带更整齐，亮度更高。原因可能是引物设计不合适：选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性，因而在进行PCR扩增时，扩增出的PCR产物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短，容易出现假阳性。需重新设计引物。
3．出现非特异性扩增带
PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或小，或者同时出现特异性扩增带 与非特异性扩增带。其原因：一是引物与靶序列不完全互补、 或引物聚合形成二聚体。二是Mg2+浓度过高、退火温度过低，及PCR循环次数过多有关。Mg2+浓度或者重新设计引物即可解决。
4．出现片状拖带或涂抹带
PCR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。其原因往往由于酶量过多或酶的质量差，dNTP浓度过高，Mg2+浓度过高，退火温度过低，循环次数过多引起。也需逐个排除
PD6202-100T Pfu DNA Polymerase|现货北京
温馨提示：不可用于临床治疗。
