Enhanced Bicinchoninic Acid Kit for Protein Determination

BSA标准品为5 mg/ml BSA，溶于水中，含0.05%叠氮钠。

本试剂盒可供480个试管或32块96孔板测试用。

室温运输和储存。如因温度低或长时间放置出现沉淀，将其摇匀即可使用。BSA标准品保存在-20度，如出现微生物污染则应丢弃。

产品简介

BCA蛋白定量试剂盒是一种基于二喹啉甲酸比色法的总蛋白检测和定量试剂盒，比Lowry法更为优越。BCA蛋白定量法以快速灵敏、稳定可靠且对不同种类蛋白质变异系数甚小而深受专业人士的青睐，样品中离子型和非离子型去污剂对其影响较小，检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝。BCA法的原理：在碱性环境下，蛋白质将铜离子还原成亚铜离子，二喹啉甲酸（BCA）与亚铜离子形成紫色的络合物，这种络合物溶于水并在562 nm处产生光吸收峰值，光吸收强度在一定范围内与蛋白质含量呈近似线性关系，因此使用比色法可以对蛋白质进行检测和定量。BCA法没有反应终点，反应会随着时间而持续进行；通过一段时间的孵育后，反应速度会变慢，从而可以对大量样品进行检测。

在蛋白质的大分子结构中，与BCA反应颜色形成相关的是肽键和四种氨基酸（半胱氨酸，胱氨酸，色氨酸，以及酪氨酸）。对二肽、三肽和四肽的研究表明，反应颜色的形成不仅仅是单个的功能基团效果叠加的结果。因此，蛋白浓度通常是根据标准对照蛋白（常用牛血清白蛋白BSA）推测而来的，即：将标准对照蛋白的光吸收值做一个浓度梯度标准曲线，未知样品的光吸收值参照曲线方程计算出蛋白浓度值。

增强型BCA蛋白定量试剂盒采用了浓缩型试剂配方，提高了孵育时间和温度，因此可以增加样品体积和增加光吸收值，从而能够检测更低浓度的蛋白，检测范围可低至0.5到20 μg/ml。

标准蛋白和工作液的配制

A.       配制牛血清白蛋白梯度：可根据检测范围和预估的蛋白浓度来配制BSA浓度梯度，*使用与待测样品相同的溶剂。可按比例放大或缩小，根据实际需要计算所需用量。

B.       BCA工作液的配制

1.        根据需要测定的未知样品和蛋白标准品的数量以及复孔数来计算所需的BCA工作液体积。如使用试管进行测试，每管需1.0 mL工作液, 而使用96孔板进行测试则每孔需150 μl 工作液。

2.        按 组份A:组份B:组份C = 25:24:1 的比例配制BCA工作液。组份C加入组份A+B的时候，开始会出现浑浊并随着混匀很快消失，最终混匀后溶液呈苹果绿色。配置好的工作液在室温密闭的条件下24小时内稳定。