产品说明：

本试剂盒适用于克隆带有3’-末端A突出的PCR产物的克隆。本试剂盒提供的独特连接系统允许用户在1小时的时间里完成连接反应。

本公司的pUM-T载体是为简化PCR产物的克隆而设计的。许多高温DNA聚合酶，如Taq DNA聚合酶、Tth DNA聚合酶等扩增的PCR产物在3’末端后都带有一个突出的碱基A，这样的PCR产物可以用3’末端后带有一个突出碱基T的载体方便地进行克隆。

Bioteke生产的pUM-T是一种新颖的pUM系列T载体，其多克隆位点更多的单切点和β-半乳糖苷酶阅读框架的调整大大方便了克隆的蓝/白筛选。插入位点两端独特设计的两个PstI位点使插入片段可以用Pst I单酶切进行检测，也可以用非常廉价而高效的EcoR I和Hind III 双酶切进行检测。可以用M13通用引物和T7启动子引物对PCR产物进行测序。pUM-T含有T7 RNA聚合酶的启动子，可以对插入片段进行体外转录。

本文末列出了pUM-T相关的技术资料，其全序列可参照pUC19（GenBank Accession Number M77789），只是其多克隆位点部分的序列有所不同。

连接反应的准备：

PCR产物是否要进行纯化取决于扩增产物的质量。如果PCR产物非常干净，不经纯化就可直接进行连接反应。但如果是以质粒为模板的PCR产物则必须进行纯化，模板质粒有可能也形成白斑。PCR产物可以通过琼脂糖凝胶电泳分离。本公司生产的PCR产物胶回收试剂盒对70bp以上的 DNA片段能很好地进行回收。

Taq、Tth、AmpliTaq 、KlenTaq DNA、Taq plus、LA- Taq聚合酶扩增的PCR产物其末端都带有一个突出的3’-A。 Taq酶和Pfu、Pwo、Tli或Deep vent 等具有3’-5’外切酶活性的DNA聚合酶混合扩增的产物末端可能带有3’- A。具有3’-A末端的PCR产物可以直接用pUM-T进行克隆连接。具有3’-5’外切酶活性的DNA聚合酶扩增的PCR 产物是平末端，要对这种平末端PCR产物进行克隆，应先进行3’-端加A工作