描述

Thermo Scientific 活化 Ras 沉降和检测试剂盒能够通过与 Raf1 蛋白结合结构域的特异性蛋白相互作用选择性地富集和检测 GTP 结合 Ras GTPase。
活化 Ras 沉降和检测试剂盒包含纯化的 GST-Raf1 Ras 结合结构域 (RBD)、谷胱甘肽琼脂糖树脂、阳性和阴性对照品（分别为 GTPγS 和 GDP）、裂解/结合/洗涤缓冲液、抗 Ras 抗体、SDS 样品缓冲液、离心柱和收集管。该试剂盒使用 NIH 3T3 细胞的裂解物进行验证，已知该细胞系具有稳健的 Ras 活性。
活化 Ras 沉降和检测试剂盒的特点：
?高灵敏度和精确度—优化试剂、特异性抗 Ras 抗体和 Western 印迹程序可确保精确控制和半定量结果
? 经验证—对 Ras 检测进行功能检测，以确保质量和性能
? 兼容—可有效兼容小鼠、大鼠和人类来源的多种细胞类型
应用：
?追踪细胞分化、迁移、分裂和细胞骨架重排期间的 Ras GTPase 活化
? 研究活化 Ras 在癌症和血管新生中的作用
?监测使用生长因子刺激后的 Ras 活性
?筛查小分子抑制剂对 Ras 活性的影响
使用经用于活化内源性 Ras 的 GTPγS 处理的细胞裂解物相对于经灭活小 GTPase 的 GDP 处理的裂解物，验证了活化 Ras 沉降和检测试剂盒的活化 Ras 富集方法的功能和特异性。GTPγS 处理捕获 GTP 结合活化形式的 Ras，在存在内源性 Ras 时产生强烈信号。GDP 处理使 Ras 进入 GDP 结合的非活化状态，无论 Ras 蛋白水平*均几乎不产生信号。对该试剂盒进行了优化，用于使用 HRP 偶联二抗（山羊抗 小鼠 IgG，产品编号 31430）和 Thermo Scientific SuperSignal West Pico 化学发光底物（产品编号 34080）进行 Western 印迹检测。每个试剂盒均包含足够用于 30 次沉降实验的组成部分。
试剂盒组成部分也可用于免疫荧光染色。使用 NGF 刺激神经元 NS-1 细胞，以使用试剂盒中提供的 GST-RBD 蛋白和抗 Ras 抗体研究活化 Ras 的空间分布。
Ras 背景：
以大鼠肉瘤病毒致癌基因命名的 GTPase 的 Ras 超家族包含多种 Ras 同源异构体，包括 K-Ras、H-Ras 和 N-Ras。虽然三种同源异构体在不同细胞类型中的表达水平有所不同，但是一般而言，在所有癌症中约 15% 存在这些同源异构体中至少一种的激活突变。Ras 蛋白作为来自细胞外分子的细胞内信号转导的启动物，通过羧基端脂质修饰和异戊烯化与质膜相连接。这些羧基端的修饰决定了 Ras 在不同膜微结构域的定位，从而决定后续的下游信号转导。Ras 信号转导通路影响多种细胞过程，包括增殖、存活、囊泡运输和基因表达。
通过 Ras 进行的信号转导对多种细胞反应至关重要，且 Ras 的活化受到 GEF 和 GAP 蛋白的调控。GEF 蛋白通过将 GDP 从非活化 Ras 中解离来介导 GTPase 活化，以使 Ras 结合到 GTP 上。相反，GAP 蛋白通过将 GTP 水解为 GDP 灭活 GTPase。Ras 通过与效应蛋白（包括 Raf 和 PI3 激酶）相互作用来介导下游信号转导。Raf1 是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，是 MAP 激酶激酶信号转导通路的一部分，该通路可活化 ERK 和 p38，从而影响增殖和存活。PI3 激酶信号转导可使 AK 活化

规格

检测:	蛋白定量检测
Substrate Properties:	基于蛋白的底物
底物类型:	GTPase 底物
描述:	Pierce 活化 Ras 沉降和检测试剂盒
适用于（应用）:	Pull-Down
套装内容:	SDS 样品缓冲液 (2X)，1.5 mL
靶标:	Kinases (Multiple), Phosphodiesterases, ATPases, GTPases, Phosphatases
标签类型:	未标记
免疫测定试剂盒格式:	Spin Column
检测方法:	Western 印迹、化学发光

内容及储存