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CAS
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369-07-3
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中文名称
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邻硝基苯-β-D吡喃半乳糖苷
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英文名称
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ONPG
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别名
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2-Nitrophenyl β-D-galactopyranoside
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纯度
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HPLC≥98%
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分子式
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C12H15NO8
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分子量
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301.25
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外观（性状）
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White to off-white Solid
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储存条件
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Powder : -20℃, 2 years;In solvent(母液): -20℃, 1 month; -80℃, 6 months
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溶解性
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Soluble in Water ≥10mg/mL
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MDL
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MFCD00063255
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EC
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EINECS 206-716-1
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InChIKey
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KUWPCJHYPSUOFW-YBXAARCKSA-N
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InChI
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InChI=1S/C12H15NO8/c14-5-8-9(15)10(16)11(17)12(21-8)20-7-4-2-1-3-6(7)13(18)19/h1-4,8-12,14-17H,5H2/t8-,9+,10+,11-,12-/m1/s1
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PubChem CID
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96647
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SMILES
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O[C@H]([C@@H](O)[C@H]1O)[C@@H](O[C@@H]1CO)OC2=C([N+]([O-])=O)C=CC=C2
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描述
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用于检测β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)活性,是β-半乳糖苷酶的显色底物。经β-半乳糖苷酶催化后可产生黄色产物,在410－420nm波长可以检测吸光度。(It is used to detect β-galactosidase (β-galactosidase) activity and is a chromogenic substrate for β-galactosidase. After being catalyzed by β-galactosidase, a yellow product can be produced, and the absorbance can be detected at a wavelength of 410-420 nm.)
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靶点
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Others
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通路
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Others
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生物活性
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ONPG 是一种比色和分光光度计底物，用于检测 β-半乳糖苷酶活性。[1]
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In Vitro
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该酶对ONPG具有高水解能力（100％），对其天然底物乳糖具有中等活性（25.7％）。然而，酶对所有其他生色硝基苯类似物的水解能力非常弱，表明Gal308是具有窄底物特异性的β-半乳糖苷酶。为了研究重组酶的动力学参数，测定了GalP8对ONPG和乳糖的Michaelis-Menten常数（Km），转换数（kcat）和催化效率（kcat/Km）。 ONPG的kcat和Km值分别为464.7±7.8s-1和2.7±0.3mM，乳糖分别为264.2±2.1s-1和7.1±0.8mM。 ONPG（172.1 s-1mM-1）酶的kcat/Km值比乳糖（37.2 s-1mM-1）高4.6倍，这清楚地表明Gal308对ONPG的催化效率要高得多而不是乳糖[1]。
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激酶实验
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在该研究中使用包括ONPG和乳糖的两种底物测量β-半乳糖苷酶活性。通过遵循从ONPG释放的邻硝基苯酚的量来测量ONPG的β-半乳糖苷酶活性。反应混合物由100μL酶溶液和400μLONPG溶液（2.5g/L，在pH6.8的100mM Tris-HCl缓冲液中）组成。在78℃温育15分钟后，通过加入等体积的1M Na 2 CO 3终止反应。通过在A405测量来定量测定释放的邻硝基苯酚。一个活性单位定义为在测定条件下每分钟产生1μmol邻硝基苯酚所需的酶量。比活性表示为每毫克蛋白质的单位。在含有100μL酶溶液和5％乳糖的相同缓冲液中进行对乳糖活性的测定，并通过煮沸10分钟终止反应，并使用葡萄糖氧化酶 - 过氧化物酶测定试剂盒测定葡萄糖浓度。通过测量A492定量测定释放的葡萄糖。一个酶活性单位定义为每分钟释放1μmol葡萄糖所需的活性量[1]。
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数据来源文献
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[1]. Zhang X, et al. Metagenomic approach for the isolation of a thermostable β-galactosidase with high tolerance of galactose and glucose from soil samples of Turpan Basin. BMC Microbiol. 2013 Oct 24;13:237. doi: 10.1186/1471-2180-13-237
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规格
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200mg 10mM*1mL (in Water) 1g
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单位
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瓶
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