大鼠Ⅰ型胶原C端肽（CTX-Ⅰ）ELISA试剂盒价格

ELISA 的方法类型和操作步骤如下： ELISA 可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有 3 种必要的试剂： ① 固相的抗原或抗体， ② 酶标记的抗原或抗体， ③ 酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法。
　　（一）双抗体夹心法
　　双抗体夹心法：是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下：
　　（ 1 ）将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂质。
　　（ 2 ）加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。
　　（ 3 ）加酶标抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。
　　（ 4 ）加底物：夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。
　　根据同样原理，将大分子抗原分别制备固相抗原和酶标抗原结合物，即可用双抗原夹心法测定标本中的抗体。
　　操作步骤
　　 1.  标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔 10 孔，在第一、第二孔中分别加标准品 100μl ，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液 50μl ，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取 100μl 分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50μl ，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 弃掉，再各取 50μl 分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul ，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取 50μl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50μl ，混匀后从第七、第八孔中分别取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液 50μl ，混匀后从第九第十孔中各取 50μl 弃掉。（稀释后各孔加样量都为 50μl ，浓度分别为 9U/L ， 6U/L ， 3U/L ， 1.5U/L ， 0.75U/L ）。
　　 2.  加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μl ，然后再加待测样品 10μl （样品最终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
　　 3.  温育：用封板膜封板后置 37 ℃ 温育 30 分钟。
　　 4.  配液：将 20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 20 倍稀释后备用。
　　 5.  洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。
　　 6.  加酶：每孔加入酶标试剂 50μl ，空白孔除外。
　　 7.  温育：操作同 3 。
　　 8.  洗涤：操作同 5 。
　　 9.  显色：每孔先加入显色剂 A50μl ，再加入显色剂 B50μl ，轻轻震荡混匀， 37 ℃ 避光显色 15 分钟 .
　　 10.  终止：每孔加终止液 50μl ，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
　　 11.  测定：以空白空调零， 450nm 波长依序测量各孔的吸光度（ OD 值）。测定应在加终止液后 15 分钟以内进行
　　每个试剂盒操作是不同的，请按说明书操作。具体事项请来电咨询！

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